Quello che segue è una panoramica delle diverse fasi di un protocollo di colorazione con immunofluorescenza indiretta
- Pianificazione degli esperimenti e preparazione dei campioni. …
- Fissazione del campione. …
- Permeabilizzazione cellulare. …
- Blocco. …
- Incubazione di anticorpi primari. …
- Incubazione di anticorpi secondari. …
- Controcolorazione e montaggio.
Come esegui l'immunofluorescenza?
Tutte le fasi di incubazione si svolgono a temperatura ambiente
- Lava le cellule due volte e usa le pinzette per posizionare con cura il vetrino coprioggetto con le cellule capovolte nella camera umidificata.
- Fissare con il 4% di formaldeide per 10 minuti e lavare 3 ×.
- Permeabilizzare con 0,1% TX-100/PBS per 15–20 minuti e lavare 3 ×.
Come si usa l'immunofluorescenza in una cellula?
Protocollo di immunofluorescenza per cellule aderenti
- Seme 1–1,5 x104 cellule per pozzetto di un vetrino a 4 camere in 500 mL di terreno di coltura. Incubare a 37°C al 5% di CO2.
- 32–36 ore dopo la semina cellulare, rimuovere il mezzo di coltura cellulare e sciacquare le cellule 3 volte utilizzando 500 µL di PBS 1X.
Qual è un esempio di immunofluorescenza?
Ad esempio, un ricercatore potrebbe creare anticorpi primari in una capra che riconoscono diversi antigeni e quindi impiegare anticorpi secondari di coniglio accoppiati con coloranti che riconoscono la regione costante dell'anticorpo di capra (" anticorpi coniglio anti-capra").
A cosa serve la colorazione con immunofluorescenza?
La colorazione dell'immunofluorescenza (IF) è una tecnica ampiamente utilizzata nella ricerca biologica e nella diagnostica clinica IF utilizza anticorpi marcati con fluorescenza per rilevare specifici antigeni bersaglio. Seguita dall'imaging, è una tecnica molto diretta in quanto puoi effettivamente vedere qualcosa.
