Il dosaggio Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) è un metodo utilizzato per visualizzare direttamente l'interazione proteina-proteina in vivo utilizzando imaging di cellule vive o cellule fisse. … BiFC è stato descritto per la prima volta da Hu et al.
Come funziona la complementazione bimolecolare della fluorescenza?
Il principio di funzionamento del BiFC si basa sullo sviluppo di un complesso fluorescente, come risultato dell'associazione di due segmenti di una proteina fluorescente quando sono molto vicini a causa dell'interazione proteina-proteina nei frammenti, ad es., in BiFC, un fluoroforo è diviso in estremità terminali amminiche e carbossiliche.
Cos'è il test BiFC?
Il saggio di complementazione della fluorescenza bimolecolare (BiFC) consente una visualizzazione semplice e diretta delle interazioni proteiche nelle cellule viventi (45). L'approccio BiFC si basa sulla formazione di un complesso fluorescente quando due proteine fuse a frammenti non fluorescenti di una proteina fluorescente interagiscono tra loro (Fig.).
Perché viene eseguito il test BiFC?
L'idea di BiFC è esprimere metà della GFP fusa con le proteine di interesse Se i POI interagiscono, potresti riunire entrambe le metà per ottenere una GFP funzionale. Quindi, se c'è metà di una GFP espressa nella cellula, non sono sorpreso che un anticorpo GFP possa rilevarla.
Il BiFC è reversibile?
L'irreversibilità dei complessi BiFC è stata ben documentata (10), e sembrerebbe che la maggior parte, se non tutti, i sistemi BiFC basati su proteine fluorescenti siano irreversibili (8, 33, 43, 48–51).
