Il vortex non taglierà il tuo RNA rendendolo inutilizzabile se stai eseguendo RT di priming casuale - solo se vuoi clonare mRNA lungo. Anche il supporto tecnico Invitrogen è corretto. Il cloroformio è più pesante del Trizol e affonderà sul fondo del tubo.
È sicuro agitare su vortice l'RNA?
Non agitare nel vortice i lisati di Trizol o i campioni di RNA per evitare il taglio. Dopo l'estrazione, conservare sempre i campioni di RNA in ghiaccio. Questo protocollo è progettato per campioni lisati da 1 ml di Trizol in una provetta da 1,5 o 2 ml.
Puoi riscaldare l'RNA?
Pertanto, evita le temperature elevate ( sopra +65°C) poiché queste influiscono sull'integrità dell'RNA. Invece, per sciogliere le strutture secondarie, riscaldare l'RNA a +65°C per 15 minuti in presenza di tamponi denaturanti.
Come si risospendono i pellet di RNA?
risospendere il pellet con acqua calda (40-50 gradi celc). incubare a 45 gradi celc per 10 min. mettili in +4 per 4-6 ore.
Come si precipita l'RNA?
A.
Dopo aver regolato la concentrazione di sale, l'RNA può essere precipitato aggiungendo 2,5 volumi di etanolo o 1 volume di isopropanolo e mescolando accuratamente, seguito da raffreddamento per almeno 15 minuti a -20° C.
